| Id: | PE13.1
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| Autor: | Rojas Hinostroza, Giancarlo Eduardo
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| Orientador: | Espinoza Blanco, Irma Adalberta; Roldán Gonzales, William Henry; León Sandoval, Segundo Ramos
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| Título: | Evaluación de tres primeros para la detección molecular de Giardia intestinalis en muestras fecales humanas^ies
Evaluation of three primers for molecular detection of Giardia intestinalis in human fecal samples-
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| Fuente: | Lima; s.n; 2014. 39 tab, graf.
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| Tese: | Presentada la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Medicina para obtención del grado de Licenciatura.
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| Resumen: | Introducción: Giardia intestinalis es el protozoario intestinal más común a nivel mundial y su diagnóstico parasitológico está basado en el examen microscópico, sin embargo, debido al carácter intermitente de la excreción del parásito en las heces el método puede revelar baja sensibilidad, esto ha motivado la búsqueda de nuevas alternativas de diagnóstico entre las que destacan aquellas que tiene como base la biología molecular. Objetivos: Evaluar 3 primers para la detección molecular de G. intestinalis en muestras fecales. Diseño: Se realizó un estudio observacional, de corte transversal. Lugar: Instituto de Medicina Tropical "Daniel A. Carrión", UNMSM. Procedimiento: Se evaluaron primers que amplifican las regiones de la beta-giardina y de la proteína de choque térmico 70 del ADN de G. intestinalis. Principales medidas de resultados: Se recolectó muestras fecales positivas y negativas a G. intestinales y a otros parásitos, las cuales fueron concentradas por centrifugación, luego almacenadas a -20 grados Centígrados y posteriormente analizadas mediante la técnica de PCR convencional. Resultados: Se estableció una temperatura de hibridación de 60 grados Centígrados para los primers de la beta-giardina y la proteína de choque térmico 70. La mezcla de reacción se estandarizó con las siguientes condiciones: CI2-Mg1.5 mM, primers 0.6 uM, dNTPmix 0.3 mM y taq polimerasa 0.75 U. El límite de detección de los primers fue de 87.3 ng/uL para beta-giardina, 359.5 ng/uL, para GHSP70-1 y 24.1 ng/uL, para GHSP70-2. Conclusiones: Se estableció una temperatura de hibridación y concentración de cloruro de magnesio común para los primers. Se observó un mejor límite de detección para el primer GHSP70-1 identificándose bandas en 7 diluciones con una sensibilidad y especificidad mayor que para el primer de la beta-giardina. (AU)^iesIntroduction: Giardia intestinalis is the most common intestinal protozoan worldwide and its parasitologic diagnosis is based in microscopic examination; nonetheless, due to the intermittent parasites excretion in the feces, this method could reveal low sensitivity, this has motivated the search of new diagnostic alterative such as those based on molecular biology. Goals: To assess 3 primers for the molecular detection of G. intestinalis in stool samples. Design: an observational, cross-sectional study was implemented. Settings: Tropical Medicine Institute "Daniel A. Carrion", UNMSM. Procedures: We assessed primer that amplifies beta-giardin and heat-shock protein 70 of the G. intestinalis. Main measures of: Positives and negatives stool samples for G. intestinalis and for other parasites were collected and then concentrated by centrifugation and stored at -20 degrees Celsius for further analysis using conventional PCR. Results: A 60 degrees Celsius hybridization temperature was established for the primers of beta-giardin and the heat-shock protein 70. The master mix was standardized with the following conditions: 1.5mM Cl2Mg, 0.6 uM primers, 0.3mM dNTPmix and 0.75U Taq polimerasa. Limit detections were 87.3 ng/uL for beta-giardin, 359.5 ng/uL for GHSP70-1 and 24.1 ng/uL for GHSP70-2. Conclusions: We established a common hibridization temperature and a magnesium chloride common for the primers. A better detection limit was established for the primer GHSP70-1, identifying bands in seven dilutions with sensitivity and specificity higher for the beta-giardine primer. (AU)^ien.
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| Descriptores: | Heces
Giardia lamblia/diagnóstico
Técnicas de Diagnóstico Molecular
- Estudio Observacional como Asunto
Estudios Transversales
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| Límites: | Humanos
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| Medio Electrónico: | http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/cybertesis/4286/3/Rojas_hg.pdf / es
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| Localización: | PE13.1; T, QX, 70, R78, ej.1. 010000098828; PE13.1; T, QX, 70, R78, ej.2. 010000098838 |
